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分析大鼠膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)的影響的要素

返回列表 來源:未知 發(fā)布日期:2019-09-05 11:38【

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中的血脂與中醫(yī)學(xué)中 “膏脂”的意義頗為相似, 《王氏醫(yī)存》有云: “肥人多痰,肥 人之病,皆因脾濕所致”,揭示脾虛與痰濕脂濁的 形成密切相關(guān)。脾為后天之本,主升清運(yùn)化, 脾失健運(yùn),則津液代謝異常、濁脂內(nèi)生。課題組前 期研究發(fā)現(xiàn),脾虛狀態(tài)下機(jī)體脂質(zhì)代謝紊亂程度加劇。基于上述病機(jī),課題組應(yīng)用健脾降濁法作 為調(diào)節(jié)脾虛高脂血癥大鼠脂質(zhì)代謝紊亂的主要治 法。香砂六君子湯為益氣健脾、溫中化痰經(jīng)典方劑,有研究發(fā)現(xiàn),香砂六君子湯在降血脂、抗 氧化及抗炎癥等方面療效顯著,對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化有 明顯的改善作用。



1 材料

1. 1 動(dòng)物


SPF 級(jí) SD 大鼠 40 只,8 周齡,體重 ( 190 ± 20) g,由遼寧長(zhǎng)生生物科技股份有限公司提供, 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào): SCXK ( 遼) 2015-0001。飼養(yǎng) 于遼寧中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,室內(nèi)溫度 18 ~ 22℃,濕度 40% ~ 70% ,單籠飼養(yǎng),每天 12 /12h 晝夜明暗交替。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)符合遼寧中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn) 動(dòng)物倫理委員會(huì)標(biāo)準(zhǔn),實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理審查編號(hào) 21006092017056。



1. 2 藥物

香砂六君子湯由木香 6 g、砂仁 3 g、黨參 12 g、 茯苓 12 g、白術(shù) 12 g、法半夏 6 g、陳皮 6 g、炙甘 草 6 g 組成,以上中藥飲片均購于遼寧中醫(yī)藥大學(xué) 附屬醫(yī)院。藥物浸泡 1 h 后,武火煮沸,文火煮 20 min,過濾,重復(fù)煎 3 次,合并濾液,濃縮至含 生藥 0. 57 g /ml 和 1. 14 g /ml,冷卻后 4℃保存。



1. 3 試劑及儀器

高脂飼料 ( 10% 豬油,1% 膽固醇,0. 5% 膽 酸鈉,0. 2% 甲基硫氧嘧啶,5% 蔗糖,加 83. 3% 普通飼料,北京科澳協(xié)力飼料有限公司生產(chǎn),批 號(hào): 201708180) ; HE 染色試劑盒 ( 碧云天生物技 術(shù)有限公司,批號(hào): C0105) ; D-木糖試劑盒 ( 南 京建 成 生 物 工 程 研 究 所,批 號(hào): A035 ) ; Trizol ( 批號(hào): CW0580) 、SYBR Green Mater Mix 試劑盒 ( 批號(hào): CW2582) ,康為世紀(jì)生物科技有限公司; 4% 組織細(xì)胞固定液 ( 北京鼎國(guó)昌盛生物技術(shù)有限 責(zé)任公司,批號(hào): AR-0211) ; 水合氯醛 ( 天津市 大茂化學(xué)試劑廠,批號(hào): AR 302-17-0) ; 磷脂轉(zhuǎn)移 蛋白 ( PLTP,批號(hào): ml059545) 、卵磷脂膽固醇脂 酰轉(zhuǎn)移酶 ( LCAT,批號(hào): ml520176) 、膽固醇酯轉(zhuǎn) 蛋白 ( CETP,批號(hào): ml003189) 酶聯(lián)免疫分析試 劑盒,上海酶聯(lián)生物科技有限公司。 SHZ-88 型水浴恒溫振蕩器 ( 其林貝爾儀器制造有限公司) ; MULTISKAN FC 型酶標(biāo)儀、ST16R 型冷凍高速離心機(jī) ( Thermo 公司) ; BioSpec-nano 型紫外可見分光光度計(jì) ( 日本島津公司) ; 7500 型 實(shí)時(shí) 定 量 PCR 儀 ( Applied Biosystems 公 司 ) ; TAB-120FR 型全自動(dòng)生化分析儀 ( 日本 東 芝 公 司) ; DM IL LED 普通型光學(xué)顯微鏡、ASP 6025 型 全自動(dòng)脫水機(jī)、RM2235 型手動(dòng)石蠟切片機(jī)、EG 1150H 型包埋機(jī)、HI1220 型烘片機(jī),均購自 Leica 公司。



2 方法

40 只 SD 大鼠普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng) 1 周后,按 體重采用隨機(jī)數(shù)字表法分為正常對(duì)照組、高脂組、 脾虛高脂組、香砂六君子湯正常劑量組及香砂六君 子湯高劑量組,每組 8 只。脾虛高脂組、香砂六君 子湯正常劑量組及香砂六君子湯高劑量組大鼠采用 飲食不節(jié)加力竭游泳的復(fù)合方法造脾虛模型: 飽食 1 天,禁食 2 天,飲水不限。同時(shí),每日將大 鼠于 35 ~ 37℃ 水中游泳至力竭,連續(xù)造模 15 天。 正常對(duì)照組喂飼基礎(chǔ)飼料,其余各組喂飼高脂飼料 14 周建立高脂血癥模型,自由攝食,飲水不限。 于第 10 周灌胃給藥,按人和動(dòng)物體表面積折算系 數(shù)換算,香砂六君子湯正常劑量組 ( 人體臨床 等效劑量) 及香砂六君子湯高劑量組分別給予香 砂六君子湯 5. 67、11. 34 g /( kg·d) 灌胃,正常對(duì) 照組、高脂組及脾虛高脂組給予等體積的生理鹽水 灌胃,4 周后取材。



3 結(jié)果

正常對(duì)照組肝細(xì)胞核圓且居中,細(xì)胞索結(jié)構(gòu)清 晰,肝竇正常; 與正常對(duì)照組比較,高脂組和脾虛 高脂組肝細(xì)胞腫大變圓,空泡化明顯,肝細(xì)胞形態(tài) 疏松,部分細(xì)胞核擠向胞膜,就空泡密度而言,脾 虛高脂組大鼠肝臟組織泡沫化更為嚴(yán)重; 香砂六君 子湯正常劑量組和香砂六君子湯高劑量組大鼠肝臟 細(xì)胞脂肪空泡顯著減少,肝細(xì)胞腫脹減輕,細(xì)胞排列 整齊清晰,胞核正常,兩組間差異不明顯。



4 討論

高脂血癥是由多種因素引起的脂質(zhì)代謝性疾 病,與心腦血管疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。根 據(jù)其病變特點(diǎn)將其歸于中醫(yī)學(xué) “痰濁” “脂濁”等 范疇,多為脾腎不足、瘀血痰濁日久,而致清濁不 分、濕濁痰凝瘀血積聚而形成的本虛標(biāo)實(shí)之證。 王智玉研究發(fā)現(xiàn),痰濕、氣虛體質(zhì)與高脂血癥 發(fā)病率呈正相關(guān)。痰濕體質(zhì)多由脾虛失運(yùn)或過食肥 甘厚味而致水液內(nèi)停、聚而生痰,痰滯日久則阻滯 氣機(jī),濁脂內(nèi)生。氣虛體質(zhì)之人多由先天后天之氣 生化無源或消耗過多引發(fā),氣虛、痰濕的形成過程 皆與脾虛密切相關(guān)。課題組選用具有益氣健脾、行 氣化痰的香砂六君子湯加以治療,方中黨參、白術(shù)、茯苓、炙甘草健脾益氣滲濕,陳皮、半夏行氣 燥濕化痰,木香、砂仁相使而用,加強(qiáng)行氣止痛化 濕、燥濕健脾和胃的功效,使痰濁得化、氣虛得補(bǔ)。






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