肝纖維化（hepatic fibrosis，HF）-肝硬化-肝癌是 慢性肝病發(fā)展中的三步曲，HF 與早期肝硬化是可逆 的，因此阻止及逆轉 HF 的發(fā)展，揭示 HF 新的發(fā)病 機制，一直是肝病研究的熱點。自噬在 HF 的發(fā)病機 制中發(fā)揮著重要的作用。肝細胞自噬可適應急性應 激，亦可導致肝細胞自噬性死亡。

SD 大鼠 70 只，SPF 級，5 周齡，雌雄各 半，體質量 140～180 g，由南通大學實驗動物中心 提供，實驗動物許可證號：SCXK（蘇）2014-0001， 合格證編號：NO. 201600292。

FRF 組成：黃芪（批號：1504001w）7.5 g、 白術（批號：1502001w）6 g、苡仁（批號：1502001s） 6 g、 丹 參（批 號 ： 1503002s）4.5 g、 當 歸（批 號 ： 1502002w）4.5 g、牛膝（批號：1502001w）6 g、莪術 （批號：1503001w）1.5 g、蒼術（批號：1502001w）2.5g、枳殼（批號：1410001w）2.5 g，配方顆粒劑為華潤 三九醫(yī)藥股份有限公司產品，由貴州中醫(yī)藥大學第 一附屬醫(yī)院中藥房提供。秋水仙堿片（國藥準字 H53021904），玉溪生物制藥有限公司。扶正化瘀膠 囊（國藥準字：Z20020073），上海黃海制藥有限責任 公司。

谷丙轉氨酶（ALT，批號：2015035）、谷 草轉氨酶（AST，批號：2015013）、白蛋白（ALB，批 號：2015030）、γ-谷氨?；D移酶（γ-GGT，批號： 2016001）及總膽紅素（TBIL，批號：2016013）試劑 盒，均為長春匯力生物技術有限公司產品；α-SMA， （批 號 ： E1A1032）、 Beclin- 1（批 號 ： E1A5128）、 LC3-Ⅱ（批號：E1A4007）、GAPDH（批號：E1C604- 1）抗體、HRP 標記的羊抗兔二抗（批號 E1WP318）、 RIPA 裂解液、BSA、預染蛋白 Marker、顯影液、定 影液、BCA 蛋白濃度檢測試劑盒，均購自南京恩晶 生物科技有限公司；ECL 化學發(fā)光試劑（批號： P0018A），上海碧云天生物技術公司；DMSO，美國 Sigma 公司；PVDF 膜，美國 Millipore 公司；Maxisignal Western Solution（SUDGEN，批號：15101215/16），南 京南晶生物公司； TRIpure Reagent（Aidlab，批號： 272026AX）， 北 京 艾 德 萊 生 物 公 司 ； OneScriptTM cDNA Synthesis Kit（G234）、 EvaGreen Express2 × qPCR Master Mix-ROX，均為加拿大 ABM 公司產品。

ECA-2000A 型全自動生化分析儀，吉林 維爾醫(yī)療器械有限公司；VE 180 型微型垂直電泳 槽、VE 186 型轉移電泳槽、EPS 300 型電泳儀，上 海天能科技有限公司；TY-80B 型脫色搖床，江蘇省 金壇市榮華儀器制造有限公司；WH-986 型靜音混合 器 ， 江蘇海門市其林貝爾儀器制造有限公司 ； BSA224S 型 精 密 電 子 天 平 ， 德 國 Satorius 公 司 ；MUTISKAN MK3 型酶標儀，美國 Thermo scientific 公 司；TL998-IV 型 Real time PCR 儀，西安天隆科技 公司；TC1000-G 型梯度 PCR 儀、D3024R 型低溫離 心機，美國 SCILOGEX 公司；FA2004 型電子天平， 上海上平儀器有限公司；H-7500 型透射電鏡，日本 HITACHI 公司。

結果見表 1。實 驗造模前各組大鼠體質量比較，差異無統(tǒng)計學意義 （P＞0.05）。造模 4 周時，各造模組體質量均低于正 常組，除 FRF 中劑量組外，差異均有統(tǒng)計學意義 （P <0.05）；各造模組間比較，差異無統(tǒng)計學意義 （P＞0.05）。造模 8 周結束時，各造模組體質量仍低 于正常組，除模型組、FRF 中劑量組外，差異均有 統(tǒng)計學意義（P < 0.05）；各造模組間比較，差異無統(tǒng) 計學意義（P＞0.05）。藥物干預 4 周結束時，各藥物 干預組體質量仍低于正常組，除模型組、FRF 中劑 量組外，差異均有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）；但與模型 組比較，各給藥組的體質量差異無統(tǒng)計學意義（P＞ 0.05）。提示 HF 造模能影響大鼠體質量，但陽性藥 及 FRF 的干預作用不明顯。正常組比較，模型組的 ALT、AST、γ-GGT、TBIL 含量顯著增高（P < 0.05，P < 0.01），ALB 含量顯著 降低（P < 0.01）。與模型組比較，F(xiàn)RF 各劑量組的 ALT、AST、TBIL 均顯著下降（P < 0.05，P < 0.01）， ALB 含量顯著升高（P < 0.05，P < 0.01），F(xiàn)RF 中、 高劑量組的 γ-GGT 顯著下降（P < 0.05，P < 0.01）。Masson 切片顯示正常組僅于匯管區(qū)有少量藍染的膠原纖維分布，無明顯膠原增生。與正常組 比較，模型組大鼠的門管區(qū)藍染纖維組織增多，中 央靜脈壁增厚，多數(shù)大鼠藍染的纖維組織自門管區(qū) 或中央靜脈向外延伸，少數(shù)大鼠有纖維隔形成，呈 藍染；HF 程度分級經非參數(shù)檢驗，與正常組比較差 異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。與模型組比較，給藥組 大鼠的肝纖維組織增生程度均有不同程度的減輕， 膠原纖維減少、變細；肝纖維化程度分級，除 FRF 低劑量組外，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。

3 討論

自噬是細胞降解亞細胞結構，維持細胞內環(huán)境平 衡的生物過程 。Beclin-1 作用于自噬的起始階段， 參與自噬體的形成，是自噬啟動的關鍵基因。 LC3-Ⅱ亦參與了自噬體的形成，是定位于自噬體膜 的結構蛋白，與自噬體的數(shù)量呈正相關，是反映自噬水平高低的重要指標，是檢測自噬活性和自噬體 形成的標志基因。自噬在 HF 的能量代謝中起重要 的作用，能促進 HF 的發(fā)生。在 HF 過程中，肝細胞 損傷壞死，而 HSC 活化，兩者自噬調控異常是 HF 的重要病理機制。CCl4誘導的 HF 小鼠模型中 LC3- Ⅱ表達增加，體外激活的小鼠 HSC 存在自噬流量增加，提示自噬與 HSC 活化關系密切。自噬通過降 解脂滴為 HSC 轉化為 MFB 提供能量，MFB 大量合 成膠原纖維，促進 HF 的發(fā)生與發(fā)展 。自噬對肝細 胞而言是一把雙刃劍，可能幫助其生存，也可能促 進炎癥而損害肝細胞。自噬對 HSC 具有保護作用， 能為 HSC 表型轉化提供能量，促進 HF。自噬參與了 HF 發(fā)生的多個環(huán)節(jié)，可能參與肝細胞變性壞死，亦 可能助其存活，而在 HSC 活化過程中自噬顯著增 加，自噬抑制劑能抑制 HSC 活化，抑制 HSC 向肌成 纖維細胞（MFB）轉化。