頸椎病是指頸椎椎間盤退變及其繼發(fā)的病理改變 刺激或壓迫其周圍神經(jīng)、血管等組織而引起系列臨床 癥狀及體征，幾乎每個(gè)人在一生中都會(huì)經(jīng)歷不同程度 的頸痛，流行病學(xué)研究表明，頸椎病的人均年發(fā)生率約 為 10. 4% ～ 21. 3%，而長期低頭位工作者是頸椎病 高發(fā)人群。針刀療法直接作用于病變軟組織，進(jìn)行 局部鏟剝、切割、松解，而達(dá)到治療頸椎病的目的，是治 療頸椎病的成熟療法。許多學(xué)者認(rèn)為頸肌在維持頸 椎生物力學(xué)平衡及頸椎病發(fā)生發(fā)展過程中的每一個(gè)環(huán) 節(jié)都至關(guān)重要，目前針刀治療頸椎病的研究多為臨 床療效的總結(jié)，機(jī)制研究薄弱。本研究旨在觀察針刀 干預(yù)后頸椎病模型兔受損頸肌的形態(tài)學(xué)改變，以期為 臨床針刀治療頸椎病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料和方法

1. 1 實(shí)驗(yàn)材料

選擇 40 只清潔級(jí)新西蘭兔，平均 月齡 6 個(gè)月，體質(zhì)量(2. 5 ± 0. 5) kg，由南昌龍平兔業(yè) 有限 公 司 提 供，動(dòng) 物 合 格 證 號(hào): SCXK ( 贛) 2014 － 0005。

造模盒:自行聯(lián)系廠商并制 作;針刀:一次性無菌針刀，0. 30 mm × 30 mm，由北京 卓越華友醫(yī)療器械有限公司生產(chǎn);毫針:一次性針灸 針，0. 25 mm × 25 mm，由馬鞍山邦德醫(yī)療器械有限公 司生產(chǎn);電子針灸儀:SDZ － II 型華佗牌電針儀，由蘇 州醫(yī)療用品廠有限公司生產(chǎn);QB － 206 多用途旋轉(zhuǎn)搖 床:海門其林貝爾儀器制造有限公司;切片機(jī):金華科 迪 KD － 202A 石蠟切片機(jī);光學(xué)顯微鏡:Nikon eclipse 50i 顯微鏡，日本 Nikon 株式會(huì)社。

酒精:南昌遠(yuǎn)洋化工有限公 司;二甲苯:南昌遠(yuǎn)洋化工有限公司;石蠟:南昌明瑞化 工有限公司;蘇木素伊紅染色試劑:南昌雨露實(shí)驗(yàn)器材 有限公司。<>

1. 2 實(shí)驗(yàn)方法

1. 2. 1 動(dòng)物分組
 

動(dòng)物喂養(yǎng) 1 周后，按照動(dòng)物體質(zhì)量 進(jìn)行編號(hào)，并應(yīng)用隨機(jī)數(shù)字表法將其分為空白組、模型 組、針刀組及電針組，每組 10 只。實(shí)驗(yàn)過程中，除空白 組以外，所有動(dòng)物參與造模。于江西中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ) 醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心喂養(yǎng)動(dòng)物，所有動(dòng)物自由進(jìn)食飲 水。

參照余家闊 報(bào)道的長期低頭位 造模方法，使家兔頸部屈曲呈 45°，每天造模 1 次，使 造模兔持續(xù)保持低頭位 5 h，連續(xù) 12 周。造模前及造 模后 2 h 節(jié)點(diǎn)分別進(jìn)行頸椎側(cè)位 X 線片拍攝，以判斷 造模是否成功。

空白組:正常飼養(yǎng)。模型組:造模 后正常飼養(yǎng)。電針組:造模成功 1 周后進(jìn)行電針干預(yù)。 具體電針干預(yù)方法為:參照《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》，根據(jù)比 較解剖取穴法結(jié)合模擬骨度取天柱、百勞、大杼穴，毫 針針刺，刺入深度約 10 mm，接韓氏穴位神經(jīng)刺激儀 (型號(hào):HANS LH202H)，頻率 2 ～ 100 Hz，強(qiáng)度 1 mA， 波形疏密波，每次 20 min。隔天治療 1 次，每周 3 次， 共治療 3 周。 針刀組:造模成功 1 周后進(jìn)行針刀干預(yù)。針刀操 作按照以下步驟:①定點(diǎn):對(duì)模型兔頸椎棘突兩側(cè)的軟 組織進(jìn)行觸診，尋找硬結(jié)和條索狀物，根據(jù)頸部肌肉僵 硬度和條索狀物的部位，在 C2 ～ C7 棘 突 旁 開 1 ～1. 5 cm處和 C2 ～ C7 棘突點(diǎn)，每次于兩側(cè)分別定兩點(diǎn) 和相應(yīng)棘突點(diǎn)為進(jìn)針點(diǎn)，4 次針刀干預(yù)進(jìn)針點(diǎn)交替選 取，對(duì)進(jìn)針點(diǎn)標(biāo)記，消毒;②定向:刀口線與后正中線平 行，刀體與項(xiàng)后冠狀面垂直;③加壓:戴無菌手套，以左 手拇指為押指，在進(jìn)針點(diǎn)按壓;④刺入:針刀迅速刺入 進(jìn)針點(diǎn)皮下組織達(dá)骨面，對(duì)病變部位行縱向小范圍切 割 3 次、橫向剝離 2 次后出針，切割范圍在 3 mm 內(nèi)， 出針刀加壓止血 3 min。針刀干預(yù)每周 1 次，共干預(yù) 3 次，共 3 周。

實(shí)驗(yàn)取材于干預(yù)結(jié)束 1 周后進(jìn)行。采 用空氣栓塞法將所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物處死，切開頸部皮膚，迅 速取出頸后伸肌(具體為 C3 ～ C4 棘突旁深層肌肉)， 生理鹽水沖洗后放入 10% 福爾馬林溶液中，固定 7 d 后，使用石蠟將頸肌組織常規(guī)包埋、切片處理，切片厚 度約 6 μm。

二甲苯透明 10 min × 3 次脫蠟，梯 度乙醇脫水各 5 min，蒸餾水沖洗 5 min，染色:蘇木精 染色 5 min，自來水洗，鹽酸酒精分化 15 s，自來水洗 15 min，0. 5% 伊紅染色 1 min，蒸餾水洗 2 min，再次梯 度酒精脫水 5 min，染色后再次二甲苯透明 5 min × 3 次脫蠟，使用中性樹膠封固頸肌組織切片，在光鏡下觀 察并拍照。

各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物造模前一般情況良好，皮毛光澤柔 順，神態(tài)安靜，雙眼有神，體態(tài)自然，性情溫和，反應(yīng)靈 敏，攝食飲水正常，排便正常。造模后模型組新西蘭兔 與空白組相比，整體情況較差，皮毛臟亂，精神不振，雙 眼無神，體態(tài)蜷縮，喜臥少動(dòng)，膽小怯人，食欲不佳，體 質(zhì)量下降，部分出現(xiàn)腹瀉，及前肢跛行、活動(dòng)不利等。 針刀及電針治療期間整體狀態(tài)有所改善。

針刀及電針治療結(jié)束后，對(duì)各個(gè)組別的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 進(jìn)行頸部觸診?？瞻捉M實(shí)驗(yàn)兔頸部肌肉柔軟，無僵硬、 緊張感，活動(dòng)靈活;模型組實(shí)驗(yàn)兔頸部肌肉僵硬、緊張， 可觸及明顯條索狀物、結(jié)節(jié);針刀組頸椎周圍肌肉柔 軟，未觸及明顯條索、結(jié)節(jié);電針組與模型組比較，可觸 及條索狀物及結(jié)節(jié)變小。

造模前(第 1 次 X 線):X 線見各組動(dòng)物生理曲度 存在，無骨贅形成、無椎間隙狹窄、椎間孔大小正常。 模型 組:整體上出現(xiàn)生理曲度變直，椎體邊緣見骨質(zhì)增生、 椎間隙變窄、椎間孔變小等病理改變，部分可見反張。 針刀組、電針組 X 線整體情況與模型組基本相似。

空白組可見肌組織標(biāo)本顏色 多為淡粉色，表面較光滑，平直無扭曲。 模型組可見肌組織標(biāo)本顏色暗，部分標(biāo)本呈暗褐 色，表面不平整，組織迂曲。

所有標(biāo)本經(jīng) HE 染色后在 光鏡下(HE，40 × 10)觀察。

近些年，隨著頸椎病發(fā)病機(jī)制研究的深入，頸椎病 發(fā)病機(jī)制研究重點(diǎn)已逐漸從重視椎間盤、椎體、小關(guān)節(jié) 等骨質(zhì)退變 轉(zhuǎn)變?yōu)榧∪?、韌帶等軟組織病變。許 多研究證實(shí)了頸部肌肉組織病變是頸椎病發(fā)病的重要 機(jī)制，甚至有學(xué)者提出了“肌源性頸椎病期”的專 科分期，認(rèn)為頸椎病的發(fā)病是由于各種原因使頸部 肌肉發(fā)生病變，導(dǎo)致無菌炎癥產(chǎn)生，進(jìn)一步刺激、卡壓 其附 近 神 經(jīng)、血 管 等 組 織，從而誘導(dǎo)頸椎病發(fā)病。 Wharton 在電鏡下觀察到頸椎病患者頸部肌肉肌纖 維萎縮、大量線粒體聚集，且病情越嚴(yán)重，這些病理變 化更加明顯。動(dòng)物實(shí)驗(yàn) 也證實(shí)了損傷的頸部肌肉 可見明顯的組織形態(tài)與結(jié)構(gòu)改變。 研究表明頸部軟組織保證了頸椎生理曲度及穩(wěn)定 性，一旦軟組織發(fā)生病變必然引起頸椎生理曲度改變 和節(jié)段失穩(wěn)，長期低頭位姿勢可使頸部肌群超 負(fù)荷，出現(xiàn)并加重其勞損。

本研究中實(shí)驗(yàn)動(dòng)物造模前、 造模后分別拍攝頸椎 X 線側(cè)位片，造模前實(shí)驗(yàn)動(dòng)物頸 椎生理曲度存在，椎間隙大小正常，未見明顯骨質(zhì)增生 等病理變化。造模后實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 X 線見椎間隙明顯變 小，骨贅形成，曲度變直、甚至反弓，表明成功建立了頸 椎病模型。頸椎生理曲度異常是各型頸椎病早期 X 線征象，頸曲是 C4 ～ C5 椎間盤前厚后薄形成的 前凸性生理彎曲，正常生理曲度可增加頸椎強(qiáng)度及其 彈性、吸收震蕩，是維持頸椎生理功能的基礎(chǔ)。而研究 表明附著于頸椎周圍的軟組織對(duì)維持頸椎生理曲度及 頸椎穩(wěn)定性方面起著重要作用。 多項(xiàng)實(shí)驗(yàn) 在光鏡下觀察頸椎病模型兔頸肌 的組織形態(tài)，發(fā)現(xiàn)針刀可改善損傷肌肉的組織形態(tài)。 也有研究在電鏡下觀察肌外膜纖維超微結(jié)構(gòu)，研究結(jié)果提示針刀干預(yù)可減輕肌纖維化現(xiàn)象，進(jìn)一步修復(fù) 肌肉。齊丹丹等進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)針刀操作時(shí)，局部既出 現(xiàn)了反應(yīng)性炎癥變化，同時(shí)又出現(xiàn)了肌纖維修復(fù)的現(xiàn) 象，并逐漸接近正常肌肉組織。本研究結(jié)果與之前的 研究相一致。本實(shí)驗(yàn)光鏡下觀察到模型組肌纖維形態(tài) 明顯改變、細(xì)胞核增多、炎性細(xì)胞聚集等病理性改變， 而針刀組和電針組兔頸肌整體情況與模型組比較，明 顯改善，且針刀修復(fù)頸部勞損肌肉的效果優(yōu)于電針。 由此可見，針刀干預(yù)能夠有效消除炎性細(xì)胞，減輕受損 肌纖維病理變化，有效促進(jìn)病變肌肉組織修復(fù)，可能是 針刀治療頸椎病的作用機(jī)制之一。